miércoles, 28 de noviembre de 2012

3.4.3 Fusión de protoplastos



La transparencia 77 muestra una típica suspensión de protoplastos de Nicotiana tabacum. Los protoplastos son células vegetales desprovistas de pared celular. La introducción en la década de los años 60 de métodos de aislamiento de protoplastos viables por tratamientos enzimáticos posibilitó su obtención a gran escala y su utilización para estudios experimentales. En medios nutritivos adecuados y bajo condiciones controladas de cultivo, los protoplastos pueden regenerar su pared celular, dividirse y diferenciarse dando lugar a plantas completas.

Los protoplastos constituyen un explanto ideal para diferentes aplicaciones biotecnológicas. La ausencia de pared celular rígida y la completa exposición de la membrana plasmática hacen de los protoplastos un sistema útil para el estudio de los fenómenos de transporte a través de esta última. Numerosas investigaciones acerca del proceso de infección y replicación de virus fitopatógenos se han valido de los protoplastos como herramienta de indagación. También han sido utilizados para la elucidación de la especificidad y modo de acción de patógenos fúngicos y bacterianos. Los protoplastos aislados son capaces de incorporar organelas exógenas, tales como núcleos y cloroplastos, así como también ADN, proteínas, y otras macromoléculas, lo que posibilitó el desarrollo de ensayos de transformación genética y de fusión. Estos explantos pueden ser empleados con éxito en ensayos de mutagénesis y la regeneración posterior de plantas transgénicas.

El incremento en la variabilidad genética puede inducirse en poblaciones homogéneas de células vegetales, protoplastos o callos, mediante la exposición a agentes mutagénicos físicos o químicos. Estos agentes permiten de incrementar el aislamiento de variantes genéticas cuando los cultivos son mantenidos bajo condiciones selectivas que permiten la rápida detección de mutantes. Los principales tipos de mutantes son: a) auxotróficos; aquellos que requieren suplementos nutricionales para su crecimiento; b) resistentes; los que resisten a drogas específicas, antimetabolitos o condiciones nutricionales anormales y c) autotróficos; aquellos que crecen y prosperan en medios de cultivo deficitarios y son capaces de sintetizar compuestos normalmente requeridos por las líneas wild type.

























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